原发难治性弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）因其低生存率和高复发率，长期以来被认为是淋巴瘤治疗领域的一大难题。近期由福建协和医院放疗科、血液科联合福建中医药大学附属第三人民医院血液科等多学科团队，在国际顶级期刊MedComm（最新影响因子10.7）上发表了Ⅱ期临床研究的初步成果。该研究提出了一种“短程放疗+免疫化疗”的创新治疗方案，本研究中GeoMx DSP空间转录组服务由诺禾致源提供。

图1 方案设计

最常见的淋巴系统恶性肿瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL），占每年非霍奇金淋巴瘤诊断病例的32%。R-CHOP方案（含利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松）因其在改善生存结局方面的疗效而广受认可，可使半数以上DLBCL患者获得缓解。然而，约25%患者经一线治疗后仍无法达到完全缓解（CR），被归类为原发性难治性疾病。对此类患者，二线治疗通常采用挽救性化疗序贯自体干细胞移植（ASCT）或嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）疗法。

放射治疗（RT）作为有效的局部治疗策略，可在移植或CAR-T治疗前减少残余肿瘤负荷，有望提升部分患者的治愈率。除局部减瘤效应外，大分割桥接放疗还可能通过促进肿瘤抗原释放、重塑肿瘤免疫微环境（TIME）等方式增强CAR-T细胞疗法等免疫治疗的全身疗效。RT调控TIME的核心机制在于其能增强肿瘤微环境（TME）中的T细胞浸润与活化。研究显示，RT可通过上调CCL5和CXCL9等特定趋化因子的表达，这些因子在募集并引导T细胞向肿瘤部位归巢中起关键作用，从而增强T细胞介导的肿瘤控制作用。

基于上述发现，RT联合免疫检查点抑制剂（ICIs）已成为DLBCL治疗的新兴研究方向。尽管大分割放疗安全性及疗效已获验证，但照射野外复发仍是阻碍其广泛应用的主要障碍。因此，筛选与疗效及复发相关的基因标记物，将有助于识别可能从大分割放疗中获益的患者群体。本研究使用空间生物学GeoMx DSP技术，该技术通过高分辨率空间定位基因表达分析，可深度解析TME内淋巴瘤区域与T细胞区域的差异表达基因（DEGs），为临床研究提供重要补充。区别于传统的bulk RNA测序（仅反映组织样本平均基因表达），DSP能实现细胞水平的基因表达图谱构建，精确区分不同肿瘤区域的免疫细胞与肿瘤细胞亚群，从而挖掘出与治疗应答或耐药相关的潜在生物标志物，为优化难治性淋巴瘤治疗方案提供依据。

1.入组患者情况

本研究第一阶段共纳入14例原发难治性弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者（图1B）。所有入组患者均接受R-CHOP或类R-CHOP的方案作为一线治疗，多数患者完成4周期化疗。入组时，13例患者达到部分缓解（PR），1例患者出现疾病进展（PD）。

所有患者均接受赛帕利单抗（zimberelimab）单药治疗后进行调强放疗（IMRT）或容积旋转调强放疗（VMAT）。1例患者在完成放疗后退出研究，因此13例患者被纳入意向治疗人群的主要疗效分析。其中10例（76.9%）患者在放疗前存在单发残留病灶。放疗完成后，10例（76.9%）患者按方案完成全部4周期的赛帕利单抗联合R-GemOx治疗：1例患者在第二次赛帕利单抗给药前发生PD；1例患者完成2周期R-GemOx联合赛帕利单抗治疗后出现PD；另有1例患者在完成3周期治疗后拒绝继续接受R-GemOx联合赛帕利单抗治疗。

2.疗效评估

本研究共招募13例原发性难治性弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者，经治疗后取得显著疗效：总缓解率达92.3%（12/13），其中61.5%（8/13）获得完全缓解（complete response, CR）。与常规化疗方案30%-40%的CR率相比，该治疗方案的完全缓解率提升超过50%。在安全性方面，主要观察到轻度白细胞减少，所有病例均未出现3级及以上不良事件，体现出优良的治疗耐受性。

3.数字空间分析技术（DSP）的疗效相关细胞特征

为通过实验探究肿瘤细胞与免疫微环境中实际存在的病灶间异质性，本研究选取了8例淋巴结弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)病例（3例为生发中心B细胞型[GCB]，5例为非生发中心B细胞型[non-GCB]。分别对CD20富集的淋巴瘤区域关注区域(AOIs)和CD3富集的T细胞区域进行非完全缓解(non-CR)患者与完全缓解(CR)患者中的差异表达(DEGs)分析。

对于non-CR患者，CD20富集区域(ROIs)中富集通路主要涉及免疫系统与细胞衰老相关机制等基因相关通路。在CD3富集区域中，non-CR患者则主要富集了FYN结合蛋白(FYB)、蛋白酪氨酸磷酸酶非受体6型(PTPN6)、T细胞受体CD3δ亚基(CD3D)、细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)、颗粒酶M(GZMM)和T细胞受体跨膜接头蛋白1(TRAT1)等免疫通路。值得注意的是，基于CD20/CD3高表达AOIs的DEGs空间信号分析结果预示CCL19/CCL21配体与T细胞表面CCR7受体间的潜在相互作用关系。

图2 淋巴瘤与T细胞的数字化空间图谱分析

4.T细胞浸润与疗效的相关性研究

对6例患者的肿瘤活检样本进行多重免疫组化（mIHC）分析，以验证通过数字空间分析（DSP）发现的T细胞浸润与疗效之间的关联。代表性mIHC图像显示，与未达到完全缓解（CR）的患者相比，达到CR的患者免疫细胞浸润程度更高。CR组患者的CCR7+、CD45RO+、CD4+ T细胞及CD8+ T细胞密度均呈升高趋势。与未达到CR的患者相比，CR患者的CCR7+CD45RO+CD8+ T细胞密度显著更高。此外，基于GSE31312数据集的分析进一步证实了T细胞浸润与弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）治疗疗效的关联。结果显示，更高的CD4+ T细胞丰度与无进展生存期（PFS）改善的趋势相关，而更高的CD8+ T细胞丰度则与PFS显著改善相关。这些结果表明，T细胞（尤其是CD4+和CD8+ T细胞）的浸润可能在改善DLBCL患者的治疗结局和预后中发挥关键作用。

图3 完全缓解与非完全缓解患者肿瘤免疫微环境中T细胞亚群的代表性多重免疫组化(mIHC)图像及定量分析

本研究提供了有力证据，表明采用大分割放疗联合赛帕利单抗治疗原发难治性弥漫性DLBCL兼具疗效与安全性。研究通过详细的区域特异性转录组学（DSP空间转录组）及免疫分析为精准筛选适用于该新型治疗策略的原发难治患者提供了新见解。